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病毒灭活检测

简要描述:病毒是一种个体微小,结构简单,只含一种核酸(DNA或RNA),必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物.病毒灭活试验是利用某种有代表性的活病毒及其细胞感染技术,评价各种消毒因子的病毒杀灭效果,验证消毒因子的病毒灭活能力.

  • 产品厂地:广州市
  • 厂商性质:其他
  • 更新时间:2021-04-13
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详细介绍

       病毒灭活检测病毒是一种个体微小,结构简单,只含一种核酸(DNA或RNA),必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物。

       病毒是一种非细胞生命形态,它由一个核酸长链和蛋白质外壳构成,病毒没有自己的代谢机构,没有酶系统。因此病毒离开了宿主细胞,就成了没有任何生命活动、也不能独立自我繁殖的化学物质。它的复制、转录、和转译的能力都是在宿主细胞中进行,当它进入宿主细胞后,它就可以利用细胞中的物质和能量完成生命活动,按照它自己的核酸所包含的遗传信息产生和它一样的新一代病毒。

       病毒灭活检测病毒是一种可以在其它生物体间传播并感染生物体的微小生物(其实因为病毒本身不能进行新陈代谢,所以某种程度上还不能说病毒是生物)。有时使用“病毒”描述那些在真核生物中传播和感染的生物;使用“噬菌体”或“吞噬体”来描述那些在原核生物间传播的生物。

       灭菌:是指用物理或化学的方法杀灭全部微生物,包括致病和非致病微生物以及芽孢,使之达到无菌保障水平。经过灭菌处理后,未被污染的物品,称无菌物品。经过灭菌处理后,未被污染的区域,称为无菌区域。

       消毒:消毒是指杀死病原微生物、但不一定能杀死细菌芽孢的方法。通常用化学的方法来达到消毒的作用。用于消毒的化学药物叫做消毒剂。

       通过上面的两个概念你可以知道无论是细菌还是病毒在灭菌操作下都会被杀死,灭菌操作下除部分细菌的芽孢基本微生物都可以杀灭,不过也根据消毒液使用的不同或者微生物的耐受不同而效果不同。

   病毒灭活试验是利用某种有代表性的活病毒及其细胞感染技术,评价各种消毒因子的病毒杀灭效果,验证消毒因子的病毒灭活能力。

  病毒灭活检测,首先需要根据具体的产品具体的病毒灭活分析,病毒灭活效果验证,要找专业可靠具备CMA资质认证的病毒杀灭试验检测中心机构--广州市微生物研究所有限公司。

       病毒杀灭效果试验,主要适用于消毒产品鉴定或日常监测。用具有一定代表性的、活的病毒及其细胞感染技术,评价各种用途的消毒因子对测试病毒的杀灭效果。按此方法进行的试验,只是对消毒因子的灭活病毒能力的重要方面进行验证。

       具体的病毒杀灭试验检测,不同的检测单位机构,收费标准不同。不同的病毒杀灭验证,收费要求也会不同。本公司通过实验室资质认定,具备CMA及CNAS资质认证,能够严格按照病毒灭活验证标准方法,进行试验检测,出具可靠的CMA报告。

    病毒失去感染性,称为灭活。了解灭活的条件不仅对从患者分离病毒、防腐和消毒是必要的,而且和疫苗生产也有关系。病毒灭活的机理有三。

        一、破坏包膜:包膜含有脂类物质,因之有包膜的病毒可迅速被脂溶剂破坏,如乙醚或去氧胆酸钠可使病毒灭活。实际上可利用病毒对脂溶剂的敏感性来检查病毒是否有包膜。物理因子,如渗透压改变、冻融、热和干燥等都可引起包膜破坏。一般认为,呼吸道感染的病毒对于燥抵抗力弱,传播主要是人间直接感染,这是因为有包膜的原故。

       二、病毒蛋白质变性:能使蛋白质变性的化学制剂都能使病毒灭活,加热引起变性也是有效灭活的方法。一般说病毒对热抵抗力弱,60℃几分钟就使之感染性明显降低,因此在分离病毒时,从患者取来的标本需低温保存,迅速送往实验室,长期保存要置于-80℃以下的低温条件。

        三、病毒核酸的损害:X线、γ线等电离辐射可切断核酸,紫外线可使核苷酸链上相邻的嘧啶碱基形成二聚物,而破坏病毒基因的功能。另外吖啶橙或中性红等染料可与病毒核酸结合,暴露于光线之下,可使核酸分解,而使病毒灭活。

病毒杀灭效果检测项目  

测试菌株 

服务内容 

整机类(包括空气净化器、消毒器械、过滤器、生活家电等具备消毒净化能力的产品)

流感病毒(HN系列)、肠道病毒、单纯疱疹病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒、人乙型流感病毒、腺病毒、PRV伪狂犬病毒、登革病毒2型、轮状病毒、大肠杆菌噬菌体、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、鼻病毒、噬菌体等。

(注:此处未标出或有其他测试毒株要求的可以咨询业务人员)

1.可自行提供测试方案或委托我司根据测试产品的特性,制定测试方案;

2.整机测试目前可提供试验舱尺寸为30m³;

3.消毒剂类产品结果评定不包含中和剂鉴定,若需要中和剂鉴定结果,请详细说明。

 

  近年来,随着单抗市场在国内的兴起,对病毒清除技术(灭活和去除)的验证也提出了更高的要求,从最初的低pH孵育到最近几年除病毒膜过滤技术在病毒清除方面的成熟的应用,包括层析技术也逐渐被大家重视,从而进一步提高下游工艺对于病毒的总的对数清除率。

  在验证实验中,不管是哪种病毒清除技术,都是通过人为挑战病毒,然后采用感染力或者其他适合的分析方法来估测样品中的病毒滴度,然后测量出该步骤的病毒对数清除率,因此选择一种合适的病毒灭活检测分析方法对于病毒对数清除率的计算非常重要。

  在病毒清除验证中,病毒的检测分为三种情况:

  1、根据病毒的感染性来定量病毒的滴度,有两种方法,一称为病毒空斑形成实验。二称作TCID50半数细胞培养物感染量实验,这种检测方法是以细胞培养物中产生细胞病变效应(Cyto-pathic Effect,CPE)为基础的检测手段。

  2、定量PCR的方法,尽管空斑形成和TCID50这两种以细胞为基础的感染性分析被视为病毒清除研究中的估测病毒滴度的金标准,qPCR方法已经被迅速接受为病毒清除研究中估测病毒粒子的替代和补充方法。

  3、直接用电子显微镜来计数病毒数目,但是由于该方法不能区分感染性病毒颗粒与非感染性病毒颗粒,因此无法判断病毒的感染力,主要用于细胞发酵液的病毒初始量的计算中,因此着重介绍空斑形成实验,TCID50实验和qPCR三种检测方法。

   一、病毒培育与灭活实验

  1. 实验材料

  实验用病毒株,宿主细胞,细胞培养瓶与 96 孔培养板,恒温水 浴箱,二氧化碳培养箱,层流超净工作台,-80℃低温箱,二氧化碳培养箱,液氮,离心设备,移液器,细胞维持培养基,细胞完全培养基,去离子水等。

  2.实验过程

  病毒悬液制备:实验组,阳性对照组,阴性对照组。病毒培育需每日观察细胞与宿主细胞生长情况,接种细胞,病变收获病毒, 每组按照特定条件设置病毒灭杀实验验证,并每组进行噬斑病毒感染滴度测定。平均灭活对数值计算,评价。

 


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